Staphylococcus haemolyticus adalah bakteria negatif-negatif gram-positif yang sangat biasa di hospital. Dalam tahun-tahun kebelakangan ini, jangkitan yang diperoleh hospital telah mendapat perhatian yang semakin meningkat disebabkan oleh risiko yang lebih tinggi. Staphylococcus haemolyticus boleh menyebabkan jangkitan kulit, meningitis, peritonitis, dan juga sepsis. Kelewatan dalam diagnosis klinikal boleh menyebabkan status kesihatan yang semakin teruk, begitu diagnosis pesat S. haemolyticus adalah kunci kepada rawatan yang tepat.
Pasukan penyelidikan guru Ji Tuo dari Jabatan Makmal Pusat Hospital Rakyat Kedua Lianyungang, China menerbitkan sebuah artikel "pengesanan pesat dan visual Staphylococcus haemolyticus dalam spesimen klinikal dengan MIRA-LFS" dalam jurnal "Analyica chimica acta", dengan faktor impak 6.2.
1. Tinjauan Tinjauan
Dalam kajian ini, kaedah MIRA-LFS berdasarkan gen MVAA ditubuhkan untuk mengesan Staphylococcus haemolyticus. Teknologi penguatan asid nukleik isothermal yang pelbagai enzim MIRA digabungkan dengan LFS jalur ujian aliran lateral untuk mencapai pengesanan patogen yang cepat.
Eksperimen ini dijalankan pada 37 darjah, dan hasilnya dapat dikesan dalam masa 9 minit. Kepekaan pengesanan adalah 0. 147cfu/reaksi.
Kaedah pengesanan MIRA-LFS sesuai untuk pengesanan titik tetap Staphylococcus hemolyticus dalam sampel klinikal, menyedari kaedah POCT untuk mengenal pasti Hemolyticus Staphylococcus, yang mempunyai nilai yang besar untuk diagnosis penyakit cepat dan rawatan di kawasan dengan perkhidmatan perubatan yang kurang mendapat perhatian.
Pasukan penyelidikan menggunakan MIRA-LFS, qPCR dan kaedah budaya bakteria tradisional untuk menganalisis 95 sampel klinikal rawak dan mengesahkan kebolehgunaan klinikal.
2. Kaedah -kaedah
Rajah skematik pengesanan MIRA-LFS ditunjukkan di atas.
Penyelidikan ini menggunakan kit penguatan pesat DNA AMP-Future Biotech (jenis jalur ujian emas koloid) dan jalur ujian pengesanan asid nukleik.
Panjang primer gen MVAA ialah 30-35 nukleotida, dan panjang produk penguatan ialah 100-350 bp. Sebanyak 6 pasang primer calon telah direka. Analisis MIRA dilakukan dengan menggunakan gDNA strain staphylococcus hemolyticus standard, primer calon telah ditayangkan, dan produk penguatan dipaparkan menggunakan elektroforesis gel agarose 2%.
Kemudian reka bentuk siasatan berdasarkan urutan primer ke hadapan (memanjangkan 16 bp ke belakang). Akhir 5 'siasatan dilabelkan dengan FITC dan akhir 3' dilabelkan dengan menyekat C3. Gunakan THF untuk menggantikan 31 nukleotida dalam siasatan. THF adalah 30 bp dari akhir 5 'dan 15 bp dari akhir 3'. Akhir 5 'primer terbalik yang dipilih dilabelkan dengan biotin.
Selain itu, pasukan penyelidikan mengoptimumkan keadaan tindak balas untuk pengesanan MIRA-LFS Staphylococcus hemolyticus. Uji pada 37 darjah pada selang 2 minit dari 4 hingga 12 minit. Hasilnya dipaparkan pada masa reaksi 8 minit dan garis ujian jelas kelihatan. Di samping itu, ujian dijalankan pada selang 5 darjah dari darjah 22-52. 37-42 ijazah adalah suhu yang paling sesuai untuk pengesanan MIRA-LFS. Oleh itu, masa tindak balas optimum dan suhu kaedah MIRA-LFS untuk Staphylococcus haemolyticus masing-masing adalah 8 min dan 37 darjah. Bersama -sama dengan hasil akhir yang digambarkan oleh LFS dalam masa 1 minit, jumlah masa pengesanan adalah 9 minit.
3. Hasil eksperimen
Pengesahan kepekaan
Ujian MIRA-LFS dilakukan pada kepekatan DNA genomik (gDNA) yang berbeza yang diperolehi daripada budaya staphylococcus haemolyticus yang dicairkan (1 0^6-10^0 cfu/ml).
Analisis regresi unit probabilistik menunjukkan bahawa LOD 95% yang ditentukan oleh ujian MIRA-LFS adalah 0. 147 CFU/reaksi.
Pengesahan kekhususan
Dengan menganalisis 18 strain mikroba patogen dan 15 strain Haemolyticus Staphylococcus klinikal, selektiviti pengesanan MIRA-LFS Staphylococcus haemolyticus ditentukan. Hasilnya menunjukkan bahawa ujian MIRA-LFS adalah negatif untuk 18 bakteria patogen lain dan positif untuk 15 sampel klinikal yang disahkan Staphylococcus haemolyticus.
Pengesanan MIRA-LFS sangat selektif dan sesuai untuk pemeriksaan Hemolyticus Staphylococcus.
Ujian sampel sebenar
Hospital Rakyat Kedua Lianyungang secara rawak mengumpul 95 spesimen, termasuk 35 sampel kulit dan tisu lembut, 16 sampel air kencing, 14 sampel dahak dan 30 sampel darah.
Keputusan menunjukkan bahawa kaedah pengesanan adalah 100% selaras dengan kaedah qPCR. Di samping itu, berbanding dengan standard emas (GB/T4789. 11-2003), kepekaan dan kekhususan kaedah pengesanan MIRA-LFS untuk mengenal pasti jangkitan Staphylococcus hemolyticus masing-masing adalah 100% dan 98.73%. Keputusan ini selanjutnya mengesahkan kemungkinan teknikal kaedah ini dalam mengesan Hemolyticus Staphylococcus dalam sampel klinikal.
Kaedah MIRA-LFS digunakan untuk pengesanan POCT Rapid Staphylococcus hemolyticus. Ia adalah cekap, tepat, mudah, dan kos rendah, dan membantu membuat keputusan diagnosis dan rawatan yang cepat.
Ketahui mengenai teknologi MIRA
Teknologi penguatan asid nukleik yang multi-enzim enzim AMP-enzim menguatkan asid nukleik pada suhu malar 39 darjah -42, dengan masa tindak balas hanya 5-20 minit. Di samping itu, keadaan makmal yang ketat tidak diperlukan, dan senario aplikasi dipelbagaikan: jabatan makmal hospital umum, penjagaan primer, ujian rumah, bidang, dll.
Borang produk reagen adalah pelbagai: serbuk beku kering, mikrosfera kering beku, dan sebagainya; Hasil paparan adalah pelbagai: elektroforesis gel, lengkung pendarfluor, jalur ujian emas koloid, dan lain -lain. Reagen mempunyai prestasi yang stabil, mudah dikendalikan, dan mudah untuk penyimpanan dan pengangkutan.
Dengan MIRA sebagai teknologi platform teras, ia telah membangunkan satu siri produk sokongan seperti "teknologi pelepasan asid nukleik ultra cepat", "pengesan pendarfluor isoterma dwi-saluran", "sistem pengesanan tertutup automatik bersepadu", "peranti pengesanan asid nukleik sendiri", dan lain-lain.