Dalam bidang diagnostik molekul, tindak balas rantai polimerase (PCR) telah lama dianggap sebagai standard emas untuk pengesanan asid nukleik. Dalam beberapa tahun kebelakangan ini, teknologi penguatan isoterma, yang diwakili oleh penguatan polimerase recombinase (RPA), telah mendapat perhatian yang semakin meningkat disebabkan oleh kelajuan, kesederhanaan dan kesesuaiannya untuk ujian-tapak.
Walaupun kedua-dua PCR dan RPA adalah kaedah penguatan asid nukleik, ia berbeza dengan ketara dalam prinsip kerja, keperluan peralatan dan senario aplikasi, menjadikan setiap teknologi sesuai untuk keperluan diagnostik yang berbeza.
1. Prinsip Teras: Berbasikal Terma lwn. Malar-Penguatan Suhu
PCR ialah proses biokimia yang mampu menguatkan satu molekul DNA kepada berjuta-juta salinan dalam tempoh yang singkat. Tindak balas bergantung pada kitaran haba berulang dan terdiri daripada tiga langkah utama:
1. Denaturasi (90–95 darjah ) – DNA terkandas-berganda dipisahkan kepada helai tunggal.
2. Penyepuhlindapan (55–65 darjah ) – Primer mengikat pada jujukan sasaran.
3.Pelanjutan (72 darjah ) – DNA polimerase mensintesis helai DNA baharu.
Melalui kitaran suhu-terkawal ini, DNA sasaran dikuatkan secara eksponen dengan ketepatan tinggi. Walau bagaimanapun, PCR memerlukan instrumen kitaran haba yang kompleks dan biasanya mengambil masa 1-2 jam untuk disiapkan.
Sebaliknya, RPA beroperasi pada suhu malar 37–42 darjah, membolehkan penguatan asid nukleik pantas tanpa kitaran haba. Teknologi ini bergantung pada tindakan diselaraskan protein rekombinasi,-protein pengikat DNA-tunggal dan untai-menyesarkan polimerase DNA untuk mencapai penguatan sasaran yang sangat spesifik dalam keadaan isoterma.
Polimerase DNA yang digunakan dalam RPA mempunyai aktiviti anjakan helai tetapi tidak mempunyai aktiviti exonuclease 5'→3'. Semasa amplifikasi, primer luar memanjang sepanjang helai templat. Apabila mereka menemui kawasan terkandas berganda-yang disintesis daripada primer dalam, polimerase tidak boleh merendahkan helai hiliran dan sebaliknya menggantikannya, menghasilkan produk penguatan baharu.
Keseluruhan tindak balas dilengkapkan di bawah suhu malar, menghapuskan keperluan untuk instrumentasi yang kompleks dan mendayakan titik-sebenar-penjagaan dan ujian berasaskan medan-. Dengan memasukkan transkripase terbalik, RPA juga boleh digunakan untuk pengesanan sasaran RNA.
Hasil penguatan boleh dianalisis menggunakan berbilang format bacaan, termasuk pengesanan titik akhir,-pemantauan pendarfluor masa sebenar, ujian aliran sisi dan boleh disepadukan lagi dengan sistem CRISPR-Cas, mikrobendalir atau penjujukan generasi-seterusnya (NGS) untuk pembangunan ujian lanjutan.
Senario Aplikasi: Ketepatan Makmal lwn. Pada-Ujian Pantas Tapak
PCR telah menjadi salah satu teknologi diagnostik molekul yang paling berharga dan kekal sebagai standard emas untuk ujian asid nukleik.
Terima kasih kepada ketepatan yang tinggi,-keberkesanan dan skalabiliti, PCR digunakan secara meluas dalam diagnostik klinikal, makmal berpusat, institusi penyelidikan dan program saringan berskala-besar, di mana infrastruktur dan kakitangan terlatih sedia tersedia.
RPA, sebaliknya, menawarkan kelebihan yang jelas dalam diagnostik-tapak yang pantas. Dengan amplifikasi disiapkan dalam masa seawal 20 minit, keperluan peralatan minimum dan operasi mudah, RPA sangat sesuai untuknya.
- Penjagaan kesihatan utama dan tetapan kecemasan
- Kastam dan pemeriksaan sempadan
- Saringan lapangan penyakit haiwan dan tumbuhan
- Ujian keselamatan alam sekitar dan makanan
Apabila digabungkan dengan peranti mudah alih dan jalur aliran sisi, RPA membolehkan ujian molekul yang pantas dan boleh dipercayai di luar makmal tradisional.
MIRA (Penguatan Pantas Isotermal Berbilangenzim)ialah teknologi penguatan isoterma proprietari Amp Future. Ia tergolong dalam keluarga teknikal yang sama seperti RPA dan diilhamkan oleh penggabungan semula DNA semula jadi dan mekanisme pembaikan, menggunakan pelbagai enzim berfungsi untuk mencapai penguatan asid nukleik yang cepat di bawah suhu malar.
MIRA menggunakan sistem selaras lima enzim utama, termasuk helikase, rekombinasi,-protein pengikat DNA-tunggal terkandas dan polimerase DNA, untuk membolehkan:
- Julat suhu operasi yang luas: 25 darjah –45 darjah
- Penguatan pantas: keputusan dalam masa 20 minit
- Kepekaan dan kekhususan yang tinggi
- Keselamatan yang dipertingkatkan dan mengurangkan risiko pencemaran
MIRA ialah teknologi penguatan asid nukleik yang direka khusus untuk ujian benar pada-tapak dan titik-perhatian-ujian.
Membina di atas platform MIRA, Amp Future telah membangunkan portfolio produk yang komprehensif untuk POCT molekul pantas, termasuk:
Agen Pelepas Asid Nukleik Pantas:
Asid nukleik yang boleh dikuatkan diperolehi dalam masa 5 minit pada suhu bilik; perencatan rendah, membolehkan pemuatan sampel penuh sehingga 50 μL; pengangkutan dan penyimpanan suhu bilik, tiada perlindungan cahaya diperlukan.
Reagen Penguatan Asid Nukleik Isoterma:
Penguatan selesai dalam 5-20 minit, pantas dan cekap; pelbagai bentuk reagen (serbuk lyophilized, mikrosfera lyophilized, dll.); pelbagai kaedah persembahan keputusan (elektroforesis, pendarfluor, jalur ujian).
Peranti Mudah Alih Miniatur:
Pengesan isoterma digital, alat ujian bersaiz poket-, mudah dipegang dalam satu tangan, dilengkapi dengan bank kuasa, membebaskan anda daripada kekangan makmal dan membawa ujian asid nukleik yang tepat ke lapangan.
Jalur Ujian Tunggal/Berbilang:
Dioptimumkan berdasarkan metodologi MIRA untuk keserasian yang lebih baik; digabungkan dengan teknologi MIRA, menonjolkan kemudahan.
Penganalisis Amplifikasi Asid Nukleik Automatik Sepenuhnya:
Memerlukan hanya satu operasi pemuatan sampel untuk pengesanan automatik sepenuhnya; had pengesanan kepada salinan tunggal; penguatan isoterma dan penutup automatik mengurangkan risiko pencemaran.
Pada-pakej Ujian Pantas Tapak:
Ujian-di tempat-, pada bila-bila masa, di mana-mana sahaja, semuanya dalam satu pakej; menyelesaikan ujian dalam 30 minit, tepat dan sensitif.
Untuk maklumat lanjut produk atau penyelesaian, sila hubungi kami.