Jangkitan pernafasan akut adalah penyakit pernafasan yang biasa pada kanak -kanak, sering disebabkan oleh virus. Virus syncytial pernafasan (RSV) dan adenovirus pernafasan (ADV) adalah dua patogen biasa yang menyebabkan jangkitan pernafasan akut pada kanak -kanak. Kes -kes ringan boleh menyebabkan gejala sejuk seperti batuk dan hidung berair, manakala kes -kes yang teruk boleh menyebabkan komplikasi teruk seperti radang paru -paru dan otitis media. Menurut cadangan Pertubuhan Kesihatan Sedunia, pengesanan patogen perlu cepat, tepat, sensitif, dan spesifik dan tidak boleh bergantung kepada juruteknik khusus atau instrumen besar. Oleh itu, adalah sangat penting untuk membangunkan kaedah pengesanan untuk RSV dan ADV yang dapat memenuhi keperluan pengesanan di atas.
Kumpulan Penyelidikan Pengarah Ma Dongli dari Institut Pediatrik Hospital Kanak -kanak Shenzhen menerbitkan sebuah artikel "A Journal".
Gambaran Keseluruhan Penyelidikan
Teknologi penguatan asid nukleik isothermal yang cepat enzim MIRA digabungkan dengan sistem pengesanan CRISPR/CAS. Dengan merekabentuk MIRA Primers dan CRISPR RNA (CRRNA), melakukan perbandingan pelbagai urutan, mengoptimumkan keadaan tindak balas, dan menggunakan peranti pengesanan berangka pendarfluor untuk mengesahkan kepekaan dan kekhususan.
Dan menggunakan keputusan qPCR sebagai kawalan perbandingan, konsistensi keputusan ujian 160 sampel swab tekak klinikal telah dikaji.
Hasil eksperimen
1. Kepekaan dan kekhususan kaedah pengesanan MIRA-CRISPR/CAS12A
Dalam pengesanan kaedah MIRA, pasangan primer RSV-F1/R1 digunakan untuk menguatkan asid nukleik dari sampel swab tekak RSV, ADV, PIV, RHV, MP, CP, FLUB, HMPV, FLAA, atau RSV/AdV yang dijangkiti pesakit. Kecuali untuk RSV dan ADV, yang telah menguatkan band, hasil lain adalah negatif, menunjukkan bahawa primer MIRA yang dipilih tidak bertindak balas dengan lapan patogen yang lain yang diuji dan dipelihara dengan baik.
Selanjutnya, plasmid rekombinan RSV dan ADV dicairkan 10Time menggunakan air steril, dan had pengesanan untuk RSV dan ADV adalah kedua -duanya 106salinan/ml.
({0}}: Sampel swab tekak dari pesakit dengan jangkitan bersama RSV, RSV/ADV, dan sampel patogen pernafasan lain masing-masing)
2. Bandingkan dengan qPCR
Berbanding dengan kaedah qPCR, had pengesanan RSV dan ADV adalah 103 salinan/ml
(Kepekaan Pengesanan qPCR RSV dan ADV)
Kaedah MIRA-CRISPR lebih sesuai untuk makmal akar umbi, dengan masa pengesanan pendek, operasi mudah, dan tidak perlu instrumen QPCR berskala besar untuk menyelesaikan operasi eksperimen.
3. Perbandingan sampel klinikal
Sampel swab tekak dikumpulkan dari 160 kanak -kanak dengan jangkitan pernafasan akut. Pada masa yang sama, kaedah MIRA-CRISPR dan kaedah qPCR digunakan untuk pengesanan, dan hasilnya dibandingkan dengan keputusan percubaan klinikal.
Berbanding dengan kaedah qPCR, sensitiviti kaedah MIRA-CRISPR untuk RSV dan ADV masing-masing adalah 98.1% dan 91.4%, dan kekhususan pengesanan adalah 1 0 0%. Nilai kappa lebih besar daripada 0.95, menunjukkan tahap konsistensi yang tinggi.
Kaedah MIRA-CRISPR mempunyai kelebihan pengesanan RSV dan ADV yang cepat, sensitif dan khusus. Ia dapat mengesan jangkitan virus dengan segera dan tepat, dan lebih sesuai untuk digunakan di kawasan dengan sumber perubatan yang terhad.