Di sini, wujudkan sCRAM (motif bersebelahan protospacer suboptimum (PAM)-pengantara CRISPR RNA dan nuklease Cas12a digabungkan dengan penguatan pantas isoterma multienzim), platform diagnostik-percuma pantas dan pengekstrakan yang mengesan ASFV dalam masa 20 minit. sCRAM menyepadukan langkah pelepasan asid nukleik pantas (40 darjah , 5 min) dengan satu-tindak balas tiub yang menggabungkan penguatan isoterma multienzim (MIRA) dan PAM-pengantara CRISPR/
Sistem Cas12a (37 darjah , 15 min), mendayakan instrumen-bacaan visual percuma melalui cahaya UV atau jalur aliran sisi (LFS).sCRAM menunjukkan-kepekaan pengesanan salinan tunggal dan tidak mempamerkan kereaktifan-silang dengan lima patogen babi biasa (PRRSV, PPV, PRV, PCV) dan Penilaian terhadap 111 sampel simulasi dan klinikal (termasuk darah, plasma, dan swab) menunjukkan keselarasan 100% dengan qPCR untuk bacaan UV dan 98.20% untuk LFS
bacaan, dengan kedua-dua kaedah mempamerkan kekhususan 100%. Kesederhanaan, kelajuan dan kebolehsuaian medan sCRAM menggariskan potensinya untuk pengawasan ASFV terdesentralisasi dalam tetapan-terhad sumber, menawarkan alat yang berkuasa untuk membendung wabak.
Dalam kajian ini, kami membangunkan sCRAM, platform pengesanan ASFV{0}}yang pantas dan medan yang menyepadukan PAM suboptimum-pengantara CRISPR/Cas12a dengan amplifikasi isoterma multienzim. Ujian mencapai sensitiviti-salinan 1 salinan/uL tunggal dalam masa 20 minit dan tidak menunjukkan kereaktifan-silang dengan patogen babi utama. Pengesahan klinikal merentas sampel darah, plasma dan swab menunjukkan kesesuaian penuh dengan qPCR menggunakan bacaan cahaya UV dan ketepatan 98.20% melalui jalur aliran sisi. Dengan operasi yang dipermudahkan, kepekaan dan kekhususan yang tinggi serta tafsiran hasil visual, sCRAM menawarkan potensi yang kukuh untuk-pengawasan ASFV di tapak dan{12}}aplikasi diagnostik penjagaan{13}yang lebih luas.
