Yo! Saya pembekal kit penguatan isoterma RNA, dan hari ini saya ingin berbual mengenai kemungkinan menggunakan kit ini untuk penguatan RNA sel tunggal.
Mula -mula, mari kita faham apa amplifikasi RNA sel tunggal. Single - sel RNA Sequencing (SCRNA - SEQ) telah menjadi permainan - Changer dalam Penyelidikan Biologi. Ia membolehkan kita mengkaji corak ekspresi gen sel individu, yang sangat penting kerana sel -sel dalam tisu tidak sama. Terdapat banyak heterogeniti, dan scRNA - SEQ membantu kita mengintip perbezaan ini pada tahap sel tunggal. Tetapi inilah tangkapan: jumlah RNA dalam satu sel adalah sangat kecil. Kami bercakap mengenai tahap picogram. Dan untuk kebanyakan teknik analisis hiliran, kita memerlukan kuantiti RNA yang lebih besar. Di sinilah penguatan masuk.
Jadi, bagaimana dengan menggunakan kit penguatan isoterma RNA kami untuk tugas ini? Nah, mari kita menggali kebaikan dan keburukan.
Kelebihan
1. Kesederhanaan
Salah satu faedah terbesar penguatan isoterma adalah kesederhanaannya. Tidak seperti PCR tradisional, yang memerlukan pengayuh haba untuk melalui kitaran suhu yang berbeza (denaturasi, penyepuhlindapan, dan lanjutan), penguatan isoterma berlaku pada suhu malar. Ini bermakna anda tidak memerlukan cycler terma mewah dan mahal. Anda boleh melakukan tindak balas amplifikasi dalam blok haba yang mudah atau bahkan mandi air. Bagi penyelidik yang melakukan penguatan RNA sel tunggal pada anggaran atau dalam makmal yang kurang, ini adalah tambah besar.
2. Kelajuan
Penguatan isoterma biasanya cukup cepat. Ia boleh menjana sejumlah besar RNA yang diperkuatkan dalam tempoh yang agak singkat. Apabila anda berurusan dengan sampel sel tunggal, masa adalah intipati. Anda tidak mahu menunggu berjam -jam untuk penguatan selesai. KamiMIRA RNA Isothermal Rapid Amplification Kit Basic - IIdireka untuk memberi anda hasil yang cepat, jadi anda boleh beralih ke langkah seterusnya percubaan anda tanpa membuang masa terlalu banyak.
3. Kepekaan
Kit ini sangat sensitif. Mereka dapat mengesan dan menguatkan walaupun transkrip RNA yang rendah dalam sel tunggal. Dalam analisis sel tunggal, sering terdapat transkrip yang jarang berlaku yang penting untuk memahami fungsi dan perkembangan sel. Kit penguatan isoterma kami boleh mengambil transkrip yang jarang berlaku ini dan menguatkannya, membolehkan anda mendapatkan pandangan yang lebih komprehensif mengenai profil ekspresi gen dalam satu sel.
4. Keserasian
Penguatan isothermal serasi dengan pelbagai aplikasi hiliran. Sama ada anda mahu melakukan penjujukan RNA, qPCR, atau kaedah analisis lain, RNA yang diperkuat dari kit kami boleh digunakan. Fleksibiliti ini hebat kerana ia membolehkan anda memilih kaedah analisis yang paling sesuai dengan soalan penyelidikan anda.
Kekurangan
1. Bias
Salah satu kelemahan utama mana -mana kaedah penguatan adalah berat sebelah. Penguatan isothermal tidak terkecuali. Transkrip RNA yang berbeza boleh dikuatkan pada kadar yang berbeza, yang boleh membawa kepada perwakilan yang tidak tepat dari populasi RNA asal dalam sel tunggal. Bias ini boleh menjejaskan hasil analisis hiliran, menjadikannya sukar untuk mengukur tahap ekspresi gen secara tepat. Walau bagaimanapun, pasukan R & D kami telah berusaha keras untuk meminimumkan kecenderungan ini di kamiMIRA RNA Isothermal Rapid Amplification Kit Asid Nukleik Jalur. Kami telah mengoptimumkan keadaan tindak balas dan formulasi enzim untuk membuat penguatan sebagai tidak berat sebelah yang mungkin.
2. Risiko Pencemaran
Oleh kerana penguatan isoterma dapat menghasilkan sejumlah besar produk yang diperkuatkan, terdapat risiko pencemaran yang lebih tinggi. Malah sejumlah kecil RNA atau DNA yang mencemarkan dapat dikuatkan dan muncul dalam hasil anda. Ini boleh membawa kepada positif palsu dan data yang tidak tepat. Untuk mengurangkan risiko ini, penting untuk mengikuti protokol makmal yang ketat, seperti menggunakan pipet berdedikasi, bekerja di hud yang bersih, dan menggunakan kaedah dekontaminasi yang betul.
Kemungkinan dalam senario penyelidikan yang berbeza
1. Biologi Pembangunan
Dalam biologi perkembangan, memahami bagaimana sel -sel membezakan dan membangun adalah penting. Penguatan RNA sel tunggal boleh membantu penyelidik mengenal pasti gen utama dan laluan isyarat yang terlibat dalam proses ini. Kit penguatan isoterma RNA kami boleh sangat berguna di sini. Sebagai contoh, ketika mengkaji perkembangan awal embrio, analisis sel tunggal dapat mendedahkan perubahan ekspresi gen yang terjadi ketika sel -sel mula mengkhususkan diri. Kesederhanaan dan kelajuan kit kami membolehkan para penyelidik dengan cepat menguatkan RNA dari sampel sel tunggal yang berharga ini dan mula menganalisis data.
2. Penyelidikan Kanser
Kanser adalah penyakit yang kompleks, dan analisis RNA sel tunggal dapat memberikan gambaran tentang heterogenitas sel -sel tumor. Sel -sel yang berbeza dalam tumor mungkin mempunyai profil ekspresi gen yang berbeza, yang boleh menjejaskan tingkah laku mereka, seperti metastasis dan rintangan dadah. Kit kami boleh digunakan untuk menguatkan RNA dari sel -sel kanser tunggal, membolehkan penyelidik mengkaji perbezaan ini pada tahap molekul. Kepekaan yang tinggi dari kit kami dapat mengesan transkrip jarang yang mungkin berkaitan dengan perkembangan kanser atau tindak balas dadah.
3. Imunologi
Dalam imunologi, analisis RNA sel tunggal dapat membantu memahami fungsi subset sel imun yang berlainan. Sebagai contoh, sel T boleh mempunyai subtipe yang berbeza, masing -masing dengan corak ekspresi gen yang unik. Kit penguatan isoterma RNA kami boleh digunakan untuk menguatkan RNA dari sel T tunggal, yang membolehkan penyelidik mengkaji perubahan ekspresi gen yang berlaku semasa tindak balas imun.
Kawalan kualiti
Apabila menggunakan kit penguatan isoterma RNA kami untuk penguatan RNA sel tunggal, kawalan kualiti adalah penting. Anda harus sentiasa menjalankan kawalan negatif untuk memeriksa pencemaran. Juga, idea yang baik untuk menggunakan Spike - dalam kawalan RNA. Ini diketahui urutan RNA yang anda tambahkan pada sampel sel tunggal anda pada kepekatan yang diketahui. Dengan membandingkan hasil penguatan lonjakan - dalam kawalan dengan RNA sel tunggal yang sebenar, anda boleh menilai kecekapan dan kecenderungan tindak balas penguatan.
Di samping itu, anda boleh menggunakan elektroforesis gel atau elektroforesis kapilari untuk memeriksa pengedaran saiz RNA yang diperkuatkan. Hasil penguatan yang baik harus menunjukkan pelbagai saiz RNA yang agak luas, menunjukkan bahawa pelbagai transkrip telah dikuatkan.
Kesimpulan
Kesimpulannya, menggunakan kit penguatan isoterma RNA kami untuk penguatan RNA sel tunggal pasti boleh dilaksanakan. Walaupun terdapat beberapa cabaran, seperti kecenderungan dan risiko pencemaran, kelebihan kesederhanaan, kelajuan, kepekaan, dan keserasian menjadikan mereka pilihan yang baik untuk banyak senario penyelidikan. Sama ada anda berada dalam makmal penyelidikan asas atau tetapan penyelidikan klinikal, kit kami dapat membantu anda memanfaatkan sampel RNA sel tunggal anda.
Sekiranya anda berminat untuk mempelajari lebih lanjut mengenai kit penguatan isoterma RNA kami atau mempunyai sebarang pertanyaan mengenai penggunaannya untuk penguatan RNA sel tunggal, jangan ragu untuk menjangkau. Kami sentiasa gembira dapat berbual dan membantu anda dengan keperluan penyelidikan anda. Dan jika anda sudah bersedia untuk membuat pembelian, kami berada di sini untuk memudahkan proses perolehan. Anda boleh meneroka pelbagai produk kami, termasukMIira DNA Isothermal Rapid Amplification Kit Asas, di laman web kami dan memulakan perjalanan anda dalam analisis RNA sel tunggal.
Rujukan
- Tang, F., Barbacioru, C., Wang, Y., Nordman, E., Lee, C., Xu, N., ... & Surani, Ma (2009). mRNA - SEQ keseluruhan - analisis transkrip sel tunggal. Kaedah Alam, 6 (5), 377 - 382.
- Van Dijk, DF, Nany, J., Guo, G., Sharma, R., Khodosevich, K., Adonis, X., ... & van Oudenaarden, A. (2018). Sepuluh tahun penjujukan RNNA sel tunggal. Komunikasi Alam, 9 (1), 1 -
- Chen, F., & Macosko, EZ (2019). Teknologi penjujukan RNA sel tunggal dan saluran paip bioinformatik. Protokol Alam, 14 (4), 1 202 - 1 226.