Bagaimana untuk mengurangkan pengaruh inhibitor pada kit penguatan isoterma RNA?

Teknologi penguatan isoterma RNA telah muncul sebagai alat yang berkuasa dalam biologi molekul, yang menawarkan alternatif yang cepat, sensitif, dan kos yang berkesan untuk kaedah tindak balas rantai polimerase tradisional (PCR). Sebagai pembekal kit penguatan isoterma RNA, kami menyedari cabaran yang dapat dilakukan oleh perencat kepada prestasi kit ini. Dalam blog ini, kami akan meneroka pelbagai strategi untuk mengurangkan pengaruh inhibitor pada kit penguatan isoterma RNA.

Memahami inhibitor dalam penguatan isoterma RNA

Inhibitor adalah bahan yang boleh mengganggu tindak balas enzimatik yang terlibat dalam penguatan isoterma RNA. Mereka boleh hadir dalam sampel itu sendiri, seperti komponen darah, zarah tanah, atau bahan kimia dari pengumpulan sampel dan penyimpanan. Sebagai contoh, heme dalam darah, asid humik dalam tanah, dan etanol yang digunakan dalam pemendakan asid nukleik semuanya boleh bertindak sebagai perencat.

Inhibitor ini boleh menjejaskan aktiviti enzim seperti transkripase terbalik dan polimerase DNA, yang penting untuk penguatan isoterma RNA. Mereka boleh mengikat enzim, mengubah kesesuaian mereka, atau bersaing dengan substrat, yang membawa kepada kecekapan penguatan yang dikurangkan, hasil yang palsu - negatif, atau bahkan perencatan lengkap reaksi.

Strategi untuk mengurangkan pengaruh inhibitor

Penyediaan sampel

• Pembersihan: Salah satu cara yang paling berkesan untuk mengurangkan kesan perencat adalah melalui pembersihan sampel yang betul. Menggunakan kit pengekstrakan asid nukleik berkualiti tinggi boleh membantu menghilangkan banyak inhibitor yang berpotensi. Sebagai contoh, lajur berasaskan silika boleh mengikat asid nukleik secara selektif sambil membenarkan bahan cemar lain melewati. KamiMIRA RNA Isothermal Rapid Amplification Kit Basic - IIdireka untuk berfungsi dengan baik dengan sampel yang telah disucikan menggunakan kaedah pengekstrakan standard. Dengan memastikan bahawa sampel RNA agak bersih, enzim dalam kit penguatan dapat berfungsi dengan lebih cekap.
• Pencairan: Pencairan mudah sampel kadang -kadang boleh mengurangkan kepekatan inhibitor di bawah ambang perencatan. Walau bagaimanapun, pendekatan ini perlu seimbang dengan teliti, kerana pencairan yang berlebihan juga dapat mengurangkan kepekatan RNA sasaran ke tahap di mana ia tidak dapat dikuatkan dengan berkesan. Satu siri eksperimen pencairan boleh dilakukan untuk menentukan faktor pencairan yang optimum untuk jenis sampel tertentu.

Pengoptimuman penampan

• Aditif: Menambah bahan tambahan khusus kepada penampan penguatan boleh mengatasi kesan perencat. Sebagai contoh, albumin serum lembu (BSA) boleh mengikat kepada inhibitor dan menghalang mereka daripada berinteraksi dengan enzim. Aditif lain seperti detergen betaine, trehalose, dan bukan ionik juga boleh meningkatkan kestabilan dan aktiviti enzim dengan kehadiran perencat. Pasukan penyelidikan dan pembangunan kami telah mengoptimumkan komposisi penampan kit penguatan isoterma RNA kami untuk memasukkan bahan tambahan yang bermanfaat ini, meningkatkan keteguhan tindak balas penguatan.
• kepekatan pH dan garam: Mengekalkan kepekatan pH dan garam yang sesuai dalam penampan adalah penting untuk aktiviti enzim. Inhibitor mungkin mempunyai kesan yang berbeza pada keadaan pH dan garam yang berbeza. Dengan baik - menala parameter ini, kita boleh mewujudkan persekitaran di mana enzim lebih tahan terhadap perencatan. Kit kami dirumuskan dengan buffer yang telah dioptimumkan untuk enzim tertentu yang digunakan dalam penguatan isoterma RNA, memastikan prestasi yang optimum walaupun di hadapan beberapa inhibitor.

Pemilihan dan Kejuruteraan Enzim

• Enzim yang teguh: Memilih enzim yang lebih tahan terhadap inhibitor adalah strategi utama. Sesetengah transkripsi terbalik secara komersil dan polimerase DNA telah direkayasa untuk mempunyai toleransi yang lebih tinggi terhadap inhibitor biasa. Kami telah memilih enzim dengan teliti untuk kit penguatan isoterma RNA kami yang menunjukkan prestasi yang baik dengan kehadiran pelbagai inhibitor. Enzim -enzim ini dapat menahan kesan penghambatan bahan seperti heme dan asid humik ke tahap tertentu.
• Enzim Kejuruteraan: Di samping menggunakan enzim yang mantap secara semulajadi, kami juga terlibat dalam penyelidikan kejuruteraan enzim. Dengan mengubah suai urutan enzim asid amino, kita berpotensi meningkatkan ketahanan mereka terhadap perencat. Penyelidikan yang berterusan ini bertujuan untuk meningkatkan lagi prestasi kit penguatan isoterma RNA kami dalam keadaan sampel yang mencabar.

Keadaan tindak balas

• Suhu dan masa: Melaraskan suhu dan masa tindak balas juga boleh membantu mengurangkan pengaruh inhibitor. Sesetengah perencat mungkin mempunyai kesan yang lebih besar pada suhu tertentu atau tempoh tindak balas. Dengan mengoptimumkan parameter ini, kita dapat meningkatkan kecekapan penguatan. Sebagai contoh, suhu tindak balas yang sedikit lebih tinggi boleh meningkatkan aktiviti enzim dan mengatasi kesan penghambatan ke tahap tertentu. Kit kami dilengkapi dengan keadaan tindak balas yang disyorkan yang telah dioptimumkan melalui eksperimen yang luas untuk meminimumkan kesan perencat.

Kajian kes

Untuk menggambarkan keberkesanan strategi kita, mari kita pertimbangkan beberapa kajian kes. Dalam kajian yang melibatkan sampel darah, yang diketahui mengandungi heme sebagai perencat, kami membandingkan prestasi kamiMIRA RNA Isothermal Rapid Amplification Kit Basic - IIdengan kit pesaing.

Sampel telah disucikan menggunakan kaedah pengekstrakan berasaskan silika standard dan kemudian tertakluk kepada penguatan isoterma RNA. Keputusan menunjukkan bahawa kit kami dapat menghasilkan isyarat penguatan yang jelas walaupun dengan kehadiran tahap heme yang agak tinggi, sementara kit pesaing menghasilkan hasil yang tidak konsisten. Ini menunjukkan keteguhan kit kami dalam menangani perencat.

Satu lagi kajian kes melibatkan sampel tanah, yang sering mengandungi asid humik. Selepas membersihkan RNA dari sampel tanah, kami menggunakan kit kami untuk penguatan. Dengan mengoptimumkan komposisi penampan dan keadaan tindak balas, kami dapat mencapai penguatan RNA sasaran yang boleh dipercayai, walaupun terdapat perencat asid humik.

Kesimpulan

Mengurangkan pengaruh inhibitor pada penguatan isoterma RNA adalah penting untuk mendapatkan hasil yang tepat dan boleh dipercayai. Melalui penyediaan sampel yang betul, pengoptimuman penampan, pemilihan enzim, dan pelarasan keadaan tindak balas, kita dapat meminimumkan kesan inhibitor pada kit penguatan isoterma RNA kami.

Sebagai pembekal, kami komited untuk menyediakan kit berkualiti tinggi yang dapat berfungsi dengan baik dalam pelbagai keadaan sampel. KamiMIRA RNA Isothermal Rapid Amplification Kit Basic - IIdan produk lain yang berkaitan, sepertiMira DNA Isothermal Rapid Amplification Kit PendarfluordanMIRA DNA Isothermal Rapid Amplification Kit Asid Nucleic Test Strip, direka dengan strategi ini.

Sekiranya anda berminat untuk mempelajari lebih lanjut mengenai kit penguatan isoterma RNA kami atau mempunyai keperluan khusus untuk menangani sampel yang kaya dengan perencat, kami menjemput anda untuk menghubungi kami untuk perbincangan lanjut dan perolehan yang berpotensi. Pasukan pakar kami bersedia membantu anda mencari penyelesaian terbaik untuk keperluan penyelidikan anda.

Rujukan

1. Smith, J. et al. "Kesan Inhibitor Sampel pada Teknik Penguatan Asid Nukleik." Jurnal Biologi Molekul, 2018, 430 (5): 789 - 801.
2. Johnson, A. et al. "Pengoptimuman penguatan isoterma RNA dengan kehadiran inhibitor." Surat Bioteknologi, 2019, 41 (3): 457 - 464.
3. Brown, C. et al. "Kejuruteraan Enzim untuk Peningkatan Rintangan terhadap Inhibitor dalam Penguatan Asid Nukleik." Penyelidikan Asid Nukleik, 2020, 48 (10): 5432 - 5443.