Bagaimana untuk mengukur polarisasi pendarfluor?

Polarisasi pendarfluor (FP) adalah teknik yang kuat yang digunakan dalam pelbagai bidang, termasuk biokimia, farmakologi, dan sains alam sekitar. Sebagai pembekal pengesan pendarfluor terkemuka, kami memahami pentingnya pengukuran FP yang tepat dan boleh dipercayai. Dalam catatan blog ini, kami akan meneroka cara mengukur polarisasi pendarfluor, dari prinsip -prinsip asas kepada pertimbangan praktikal.

Prinsip asas polarisasi pendarfluor

Polarisasi pendarfluor adalah berdasarkan fakta bahawa apabila molekul pendarfluor teruja dengan cahaya terpolarisasi, cahaya yang dipancarkan juga terpolarisasi. Tahap polarisasi cahaya yang dipancarkan bergantung kepada gerakan putaran molekul pendarfluor semasa hayat pendarfluor. Sekiranya molekulnya besar atau terikat kepada makromolekul, gerakan putarannya terhad, dan cahaya yang dipancarkan tetap sangat terpolarisasi. Sebaliknya, jika molekul kecil dan bebas dalam larutan, gerakan putarannya cepat, dan cahaya yang dipancarkan menjadi depolarized.

Polarisasi pendarfluor dikira oleh nilai polarisasi (p), yang ditakrifkan sebagai perbezaan antara intensiti komponen vertikal dan mendatar polarisasi cahaya yang dipancarkan dibahagikan dengan jumlahnya:

[P = \ frac {i _ {\ parallel} -i _ {\ perp}} {i _ {\ parallel}+i _ {\ perp}}]

di mana (i _ {\ parallel}) adalah intensiti cahaya yang dipancarkan secara menegak, dan (i _ {\ perp}) adalah intensiti cahaya yang dipancarkan secara mendatar.

Instrumentasi untuk mengukur polarisasi pendarfluor

Untuk mengukur polarisasi pendarfluor, anda memerlukan pengesan pendarfluor yang dilengkapi dengan optik polarisasi. Syarikat kami menawarkan pelbagai pengesan pendarfluor berkualiti tinggi, termasukPengesan pendarfluor isotermadan yangPengesan pendarfluor isoterma digital, yang direka khusus untuk pengukuran FP yang tepat dan sensitif.

Pengesan ini biasanya terdiri daripada komponen berikut:

1. Sumber cahaya: Sumber cahaya, seperti lampu xenon atau laser, digunakan untuk menghasilkan cahaya pengujaan. Cahaya harus dipolarisasi sebelum mencapai sampel.
2. Polarizers: Polarizers digunakan untuk mengawal polarisasi pengujaan dan cahaya pelepasan. Polarizer pengujaan diletakkan di jalan cahaya pengujaan untuk memastikan ia terpolarisasi secara linear. Polarizer pelepasan diletakkan di hadapan pengesan untuk mengukur komponen terpolarisasi secara menegak dan mendatar cahaya yang dipancarkan.
3. Pemegang sampel: Pemegang sampel digunakan untuk memegang sampel di jalan cahaya pengujaan. Ia harus direka untuk meminimumkan penyebaran cahaya dan pendarfluor latar belakang.
4. Pengesan: Fotodetektor, seperti tiub photomultiplier (PMT) atau peranti caj - COLLED (CCD), digunakan untuk mengukur intensiti cahaya yang dipancarkan. Pengesan harus dapat mengukur intensiti komponen terpolarisasi secara menegak dan mendatar secara berasingan.

Persediaan eksperimen untuk pengukuran polarisasi pendarfluor

Langkah -langkah berikut terlibat dalam menubuhkan percubaan untuk mengukur polarisasi pendarfluor:

1. Pilih siasatan pendarfluor yang sesuai: Pilih siasatan pendarfluor yang sesuai untuk permohonan anda. Siasatan harus mempunyai hasil kuantum yang tinggi dan jangka hayat pendarfluor yang panjang.
2. Sediakan sampel: Sediakan sampel dengan membubarkan siasatan pendarfluor dalam penampan yang sesuai. Jika anda mengkaji interaksi mengikat, tambahkan ligan atau makromolekul ke sampel pada kepekatan yang sesuai.
3. Kalibrasi instrumen: Kalibrasi pengesan pendarfluor mengikut arahan pengeluar. Ini mungkin melibatkan penyesuaian keuntungan pengesan, menetapkan panjang gelombang pengujaan dan pelepasan, dan mengukur pendarfluor latar belakang.
4. Mengukur nilai polarisasi: Letakkan sampel dalam pemegang sampel dan ukur intensiti komponen vertikal dan mendatar polarisasi cahaya yang dipancarkan. Kirakan nilai polarisasi menggunakan formula yang disebutkan di atas.

Faktor yang mempengaruhi pengukuran polarisasi pendarfluor

Beberapa faktor boleh menjejaskan ketepatan dan kebolehpercayaan pengukuran polarisasi pendarfluor:

1. Suhu: Pergerakan putaran molekul pendarfluor adalah suhu - bergantung. Peningkatan suhu membawa kepada peningkatan gerakan putaran dan penurunan nilai polarisasi. Oleh itu, adalah penting untuk mengekalkan suhu malar semasa pengukuran.
2. Kelikatan pelarut: Kelikatan pelarut mempengaruhi gerakan putaran molekul pendarfluor. Pelarut yang lebih likat mengehadkan gerakan putaran dan meningkatkan nilai polarisasi.
3. Kepekatan siasatan pendarfluor: Kepekatan probe pendarfluor boleh menjejaskan nilai polarisasi. Pada kepekatan yang tinggi, pelindapkejutan diri dan pengagregatan siasatan mungkin berlaku, yang membawa kepada pengukuran yang tidak tepat.
4. Photobleaching: Photobleaching adalah pemusnahan molekul pendarfluor yang tidak dapat dipulihkan oleh cahaya pengujaan. Ia boleh menyebabkan penurunan intensiti pendarfluor dan mempengaruhi pengukuran polarisasi. Untuk meminimumkan photobleaching, gunakan cahaya pengujaan intensiti yang rendah dan masa pendedahan pendek.

Aplikasi polarisasi pendarfluor

Polarisasi pendarfluor mempunyai pelbagai aplikasi dalam pelbagai bidang:

1. Penemuan Dadah: FP digunakan untuk mengkaji interaksi mengikat antara ubat dan sasaran mereka. Dengan mengukur nilai polarisasi, anda boleh menentukan pertalian mengikat dan pemisahan pemisahan kompleks sasaran dadah.
2. Immunoassays: Immunoassays berasaskan FP digunakan untuk mengesan kehadiran antigen atau antibodi dalam sampel biologi. Pengikatan antigen kepada probe pendarfluor yang berlabel antibodi membawa kepada perubahan dalam nilai polarisasi, yang boleh digunakan untuk mengukur analit.
3. Analisis asid nukleik: FP boleh digunakan untuk mengkaji hibridisasi asid nukleik. Pengikatan oligonukleotida berlabel fluorescently kepada urutan pelengkapnya membawa kepada perubahan dalam nilai polarisasi, yang boleh digunakan untuk mengesan dan mengukur asid nukleik sasaran.

Penyelesaian masalah pengukuran polarisasi pendarfluor

Jika anda menghadapi masalah semasa pengukuran polarisasi pendarfluor, petua penyelesaian masalah berikut mungkin membantu:

1. Nilai polarisasi yang rendah: Jika nilai polarisasi lebih rendah daripada yang dijangkakan, periksa faktor -faktor seperti suhu tinggi, kelikatan rendah pelarut, atau kepekatan tinggi probe pendarfluor.
2. Pendarfluor latar belakang yang tinggi: Pendarfluor latar belakang yang tinggi boleh disebabkan oleh kekotoran dalam sampel atau pelarut, atau oleh penyebaran cahaya. Bersihkan sampel dan gunakan pelarut yang bersih. Pastikan pemegang sampel bersih dan bebas dari calar.
3. Pengukuran yang tidak konsisten: Pengukuran yang tidak konsisten mungkin disebabkan oleh photobleaching, penjajaran miskin polarizers, atau turun naik dalam sumber cahaya. Kurangkan photobleaching, periksa penjajaran Polarizers, dan pastikan sumber cahaya stabil.

Kesimpulan

Mengukur polarisasi pendarfluor adalah teknik yang berharga untuk mengkaji interaksi mengikat dan dinamik molekul molekul pendarfluor. Sebagai pembekal pengesan pendarfluor, kami komited untuk menyediakan instrumentasi berkualiti tinggi dan sokongan teknikal untuk membantu anda mencapai pengukuran FP yang tepat dan boleh dipercayai. Sama ada anda bekerja dalam penemuan dadah, immunoassays, atau analisis asid nukleik, kamiPengesan pendarfluor isotermadanPengesan pendarfluor isoterma digitaldapat memenuhi keperluan anda.

Jika anda berminat untuk membeli pengesan pendarfluor kami atau mempunyai sebarang pertanyaan mengenai pengukuran polarisasi pendarfluor, sila hubungi kami untuk perundingan terperinci dan rundingan perolehan. Pasukan pakar kami bersedia membantu anda dalam memilih instrumen yang paling sesuai untuk permohonan anda.

Rujukan

1. Lakowicz, Jr (2006). Prinsip spektroskopi pendarfluor. Springer Science & Business Media.
2. Szollosi, J., & Damjanovich, S. (2004). Polarisasi pendarfluor: panduan praktikal. Dalam protokol semasa dalam cytometry (ms 1 - 17). John Wiley & Sons, Inc.