Yo, peminat sains sesama! Saya tersentuh untuk berbual dengan anda tentang mengoptimumkan polimerase DNA untuk penjujukan DNA yang tinggi. Sebagai pembekal polimerase DNA, saya telah melihat secara langsung betapa pentingnya ia mempunyai polimerase atas untuk teknologi pemotongan ini.
Tinggi - penjujukan DNA throughput telah merevolusikan genomik. Ia membolehkan kita untuk menyusun sejumlah besar DNA dalam masa yang singkat, yang sangat penting untuk perkara -perkara seperti ubat -ubatan yang diperibadikan, memahami penyakit genetik, dan juga kajian evolusi. Tetapi untuk ini berfungsi dengan baik, kita memerlukan polimerase DNA yang dioptimumkan.
Mari kita mulakan dengan apa sebenarnya polimerase DNA. Ia adalah enzim yang mensintesis helai DNA baru dengan menambahkan nukleotida ke rantai yang semakin meningkat. Dalam penjujukan throughput yang tinggi, kami mahu ia berfungsi dengan cepat, tepat, dan mengendalikan pelbagai jenis templat DNA.
Perkara kelajuan
Salah satu faktor utama dalam penjujukan throughput tinggi adalah kelajuan. Semakin cepat polimerase DNA dapat menambah nukleotida, semakin cepat kita dapat menyelesaikan urutan. Untuk mengoptimumkan kelajuan, kita dapat melihat kadar pemangkin enzim. Sesetengah mutasi boleh meningkatkan kadar ini. Sebagai contoh, mengubah suai tapak aktif polimerase boleh menjadikannya mengikat nukleotida dengan lebih cekap dan menambahnya ke helai DNA yang semakin meningkat.
Kami juga mendapati bahawa menyesuaikan keadaan tindak balas dapat meningkatkan kelajuan. Menggunakan penampan yang betul dengan kepekatan pH dan ion optimum boleh membuat perbezaan besar. Sebagai contoh, ion magnesium adalah faktor penting untuk aktiviti polimerase DNA. Dengan baik - menala kepekatan magnesium, kita dapat meningkatkan kelajuan enzim.
Ketepatan adalah kunci
Ketepatan sama pentingnya dengan kelajuan. Dalam penjujukan, satu kesilapan boleh menyebabkan salah tafsiran data genetik. Polimerase DNA mempunyai aktiviti pembacaan bukti, yang membantu kesilapan yang betul semasa sintesis DNA. Untuk mengoptimumkan ketepatan, kita dapat meningkatkan fungsi pembacaan ini. Beberapa polimeras kita, sepertiM - MLV H - 2.0, telah direkayasa untuk meningkatkan keupayaan proofreading. Ini bermakna kesilapan yang lebih sedikit dan hasil penjujukan yang lebih dipercayai.
Satu lagi cara untuk meningkatkan ketepatan adalah dengan mengurangkan pengikatan bukan khusus. Kadang -kadang, polimerase boleh mengikat templat yang salah atau menambah nukleotida di tempat yang salah. Dengan mengubahsuai struktur polimerase untuk menjadikannya lebih spesifik kepada templat DNA yang betul, kita dapat meminimumkan kesilapan ini.
Mengendalikan templat yang berbeza
DNA datang dalam pelbagai bentuk dan saiz, dan penjujukan throughput tinggi sering berkaitan dengan pelbagai templat. Sesetengah templat boleh menjadi sukar untuk urutan, seperti yang mempunyai kandungan GC yang tinggi atau struktur sekunder. Untuk mengoptimumkan polimerase DNA untuk templat yang mencabar ini, kami boleh menambah protein aksesori. Contohnya,SC RecA 2.0Boleh membantu mengikat struktur sekunder DNA, menjadikannya lebih mudah bagi polimerase untuk mengakses templat dan mensintesis DNA baru.
Kita juga boleh mengubah polimerase itu sendiri untuk menjadi lebih toleran terhadap templat yang berbeza. Sesetengah mutasi boleh menjadikan enzim lebih baik dalam menangani kandungan GC yang tinggi atau kawasan urutan yang sukar - ke - ke -.
Kestabilan dan umur panjang
Dalam penjujukan throughput yang tinggi, polimerase perlu bekerja untuk masa yang lama tanpa kehilangan aktivitinya. Kami dapat mengoptimumkan kestabilan dengan mengubah struktur enzim untuk menjadikannya lebih tahan terhadap denaturasi. Sebagai contoh, menambah ikatan disulfida boleh meningkatkan kestabilan protein.
Satu lagi aspek ialah rak enzim - kehidupan. Kami mahu polimerase kami tetap aktif untuk masa yang lama semasa penyimpanan. Dengan merumuskan keadaan penampan dan penyimpanan yang betul, kami dapat memastikan bahawa polimerase tetap stabil dan bersedia untuk digunakan apabila diperlukan.
Keserasian dengan platform penjujukan
Platform penjujukan throughput yang berbeza mempunyai keperluan mereka sendiri. Sebagai contoh, sesetengah platform menggunakan pengesanan berasaskan pendarfluor, sementara yang lain menggunakan teknologi nanopore. Kita perlu mengoptimumkan polimerase DNA untuk bersesuaian dengan platform yang berbeza ini.
Untuk platform berasaskan pendarfluor, polimerase tidak boleh mengganggu isyarat pendarfluor. Kita boleh membuat kejuruteraan polimerase untuk mempunyai pendarfluor latar belakang yang rendah dan berfungsi dengan baik dengan pewarna yang digunakan dalam tindak balas penjujukan.
Dalam penjujukan nanopore, polimerase perlu dapat bekerja di bawah keadaan elektrik dan kimia tertentu nanopore. Dengan memahami keperluan ini, kita boleh mengubahsuai polimerase untuk lebih sesuai untuk jenis penjujukan ini.
Portfolio produk kami
Sebagai pembekal polimerase DNA, kami menawarkan pelbagai produk yang direka untuk memenuhi keperluan penjujukan yang tinggi. KamiM - MLV H - 2.0sangat bagus untuk transkripsi terbalik dan mempunyai ketepatan yang sangat baik. TheSC RecA 2.0Boleh digunakan sebagai protein aksesori untuk meningkatkan pengendalian templat. Dan kamiExonuclease III 2.0Boleh digunakan untuk pelbagai langkah pemprosesan DNA dalam aliran kerja penjujukan.
Sekiranya anda berada di pasaran untuk polimerase DNA berkualiti tinggi untuk projek penjujukan yang tinggi, kami ingin bercakap dengan anda. Sama ada anda makmal penyelidikan, sebuah syarikat bioteknologi, atau firma farmaseutikal, kami dapat memberikan anda produk dan sokongan yang tepat. Hubungi kami untuk memulakan perbualan mengenai keperluan khusus anda dan bagaimana polimerase DNA kami dapat mengoptimumkan proses penjujukan anda.
Rujukan
- Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K., & Walter, P. (2002). Biologi molekul sel. Sains Garland.
- Brown, TA (2002). Genom. Wiley - Liss.
- Metzker, ML (2010). Teknologi Sequencing - Generasi Seterusnya. Ulasan Alam Genetik, 11 (1), 31 - 46.