Hei ada! Sebagai pembekal kit penguatan isoterma RNA, saya sering bertanya soalan ini: "Bolehkah kit penguatan isoterma RNA digunakan untuk analisis kuantitatif RNA?" Nah, mari kita menyelam ke dalamnya dan memecahkannya.
Pertama, apakah penguatan isoterma RNA? Tidak seperti tindak balas rantai polimerase yang lebih baik (PCR) yang memerlukan pelbagai kitaran suhu, penguatan isoterma RNA berlaku pada suhu malar. Ia adalah teknologi yang cukup bagus yang semakin popular dalam beberapa tahun kebelakangan ini.
Salah satu kelebihan utama menggunakan kit penguatan isoterma RNA adalah kesederhanaannya. Anda tidak memerlukan termosik yang mewah dengan semua tetapan suhu - perubahan. Ini menjadikannya lebih mudah diakses, terutamanya untuk ujian - ujian penjagaan atau dalam sumber - tetapan terhad. Tetapi persoalan besar tetap: Bolehkah ia digunakan untuk analisis kuantitatif?
Mari kita mulakan dengan melihat prinsip asas analisis kuantitatif RNA. Ringkasnya, kami ingin mengetahui dengan tepat berapa banyak molekul RNA tertentu yang terdapat dalam sampel. Ini penting dalam banyak bidang, seperti virologi untuk mengukur beban virus, atau dalam kajian ekspresi gen untuk memahami bagaimana gen dikawal.
Kaedah tradisional untuk analisis RNA kuantitatif, seperti PCR masa sebenar (qPCR), telah menjadi standard emas. QPCR menggunakan pewarna pendarfluor atau probe untuk mengesan jumlah DNA yang diperkuatkan (yang terbalik - disalin dari RNA) pada masa sebenar. Kitaran di mana pendarfluor melintasi ambang tertentu (nilai CT) kemudian digunakan untuk mengira jumlah awal RNA dalam sampel.
Sekarang, untuk kit penguatan isoterma RNA. Kit ini biasanya berfungsi dengan menggunakan enzim yang dapat menguatkan RNA pada suhu malar. Sebagai contoh,MIRA RNA Isothermal Rapid Amplification Kit Basic - IIadalah salah satu produk kami yang menggunakan teknologi ini. Ia dapat dengan cepat menguatkan sasaran RNA, tetapi bolehkah kita menggunakannya untuk mengukurnya?
Jawapannya sedikit lebih rumit daripada ya atau tidak. Di satu pihak, terdapat beberapa cabaran. Tidak seperti qPCR, yang mempunyai kaedah yang baik untuk kuantiti berdasarkan nilai CT, penguatan isotermal RNA tidak mempunyai setaraf langsung. Kinetik penguatan dalam sistem isoterma boleh menjadi lebih kompleks, dan faktor -faktor seperti keadaan tindak balas awal, aktiviti enzim, dan ketersediaan substrat boleh memberi impak yang lebih besar kepada kadar penguatan.
Walau bagaimanapun, itu tidak bermakna ia mustahil. Sesetengah penyelidik telah menghasilkan cara kreatif untuk membuat penguatan isoterma RNA sesuai untuk analisis kuantitatif. Satu pendekatan adalah menggunakan piawaian dalaman. Sama seperti dalam qPCR, anda boleh menambah jumlah molekul RNA kawalan yang diketahui ke sampel anda. Dengan membandingkan penguatan RNA sasaran dengan RNA kawalan, anda boleh mendapatkan anggaran kuantiti RNA sasaran.
Cara lain ialah menggunakan kaedah pengesanan berasaskan pendarfluor dalam kombinasi dengan penguatan isoterma RNA. Contohnya, beberapa kit kami, sepertiMIRA RNA Isothermal Rapid Amplification Kit Asid Nukleik Jalur, boleh diubah suai untuk menggabungkan probe pendarfluor. Dengan mengukur intensiti pendarfluor dari masa ke masa, anda boleh memantau proses penguatan dan berpotensi menggunakannya untuk kuantiti.
Mari kita juga bercakap tentang kelebihan menggunakan kit penguatan isoterma RNA kami untuk analisis kuantitatif jika dibandingkan dengan kaedah tradisional. Seperti yang saya nyatakan sebelum ini, kesederhanaan dan kelajuan adalah tambah besar. Dengan kit kami, anda boleh mendapatkan hasil dalam masa yang lebih singkat berbanding qPCR, yang biasanya mengambil masa satu jam atau lebih. Ini amat penting dalam situasi di mana diagnosis pesat adalah penting, seperti semasa wabak penyakit berjangkit.
Selain itu, kit kami sangat spesifik. Mereka direka untuk menargetkan hanya urutan RNA yang menarik, mengurangkan peluang hasil yang palsu - positif. Kekhususan ini penting untuk analisis kuantitatif yang tepat, kerana anda ingin memastikan anda hanya mengukur RNA yang anda minati.
Sekarang, mari kita sentuh beberapa aspek praktikal. Sekiranya anda mempertimbangkan untuk menggunakan kit penguatan isoterma RNA kami untuk analisis kuantitatif, terdapat beberapa perkara yang perlu diingat. Pertama, anda perlu mengoptimumkan keadaan tindak balas. Ini termasuk perkara seperti kepekatan enzim, primer, dan reagen lain. Tindak balas yang dioptimumkan akan memberi anda lebih banyak hasil yang boleh dihasilkan, yang merupakan kunci untuk kuantiti yang tepat.
Kedua, anda perlu mengesahkan kaedah kuantitatif anda. Ini bermakna menjalankan pelbagai replika sampel yang diketahui dan membandingkan hasil dengan kaedah rujukan, seperti qPCR. Dengan melakukan ini, anda boleh menetapkan ketepatan dan ketepatan analisis kuantitatif anda menggunakan kit penguatan isoterma RNA kami.
Kami juga mempunyai produk hebat yang lain,MIira DNA Isothermal Rapid Amplification Kit Asas. Walaupun ia untuk penguatan DNA, prinsip analisis kuantitatif boleh sama dalam beberapa cara. Ia boleh digunakan dalam kombinasi dengan analisis RNA dalam beberapa kes, contohnya, apabila anda ingin mengkaji hubungan antara tahap DNA dan RNA dalam sel.
Kesimpulannya, sementara kit penguatan isoterma RNA menghadapi beberapa cabaran ketika datang ke analisis kuantitatif RNA, mungkin dengan pendekatan yang tepat. Syarikat kami komited untuk menyediakan kit berkualiti tinggi dan menyokong pelanggan kami dalam meneroka potensi teknologi ini untuk aplikasi kuantitatif.
Jika anda berminat untuk mempelajari lebih lanjut mengenai kit penguatan isoterma RNA kami atau ingin membincangkan bagaimana mereka boleh digunakan untuk keperluan analisis kuantitatif khusus anda, kami ingin mendengar daripada anda. Cuma hubungi kami untuk memulakan perbualan mengenai perolehan dan bagaimana kami dapat bekerjasama untuk memenuhi matlamat penyelidikan anda.
Rujukan
- Notomi, T., Okayama, H., Masubuchi, H., Yonekawa, T., Watanabe, K., Amino, N., & Hase, T. (2000). Gelung - Penguatan isoterma DNA yang ditengahi. Penyelidikan Asid Nukleik, 28 (12), E63 - E63.
- Gootenberg, JS, Abudayyeh, Oo, Lee, JW, Essletzbichler, P., Dy, A., Joung, J., ... & Zhang, F. (2018). Pengesanan asid nukleik dengan CRISPR - CAS13A/C2C2. Sains, 360 (6387), 439 - 444.